目录
第１部分 基因工程实验
实验1 重组质粒pcDNA3.0-ARRB 的提取，质量检测及酶切分析……3
1.1
质粒提取……………………………………………………………… 4
1.2
质粒质量检测………………………………………………………… 6
1.3
质粒酶切……………………………………………………………… 7
1.4
琼脂糖凝胶电泳检测………………………………………………… 7
实验2 用琼脂糖凝胶电泳进行目的DNA 片段的回收及质量检测……11
1.1
用琼脂糖凝胶电泳进行目的DNA 片段的分离…………………11
1.2
从凝胶中回收目的DNA 片段……………………………………13
1.3
DNA 片段浓度及纯度检测…………………………………………15
实验3 目的DNA 片段与载体连接，感受态制备及连接产物的转化……17
1.1
连接反应……………………………………………………………18
1.2
感受态制备…………………………………………………………18
1.3
连接产物转化感受态细菌…………………………………………19
实验4 PCR鉴定细菌克隆………………………………………………23
1.1
PCR 鉴定克隆………………………………………………………24
1.2
琼脂糖凝胶电泳……………………………………………………26
实验5 SDS-PAGE 电泳及考马斯亮蓝染色分析目的蛋白的表达……27
1.1
电泳胶的制备………………………………………………………29
1.2
蛋白样品制备及SDS-PAGE 电泳…………………………………30
1.3
转膜…………………………………………………………………30
1.4
考马斯亮蓝染色……………………………………………………31
实验6 Western blot 分析目的蛋白的表达……………………………32
1.1
SDS-PAGE 电泳……………………………………………………32
1.2
转膜…………………………………………………………………32
1.3
封闭…………………………………………………………………33
1.4
一抗孵育……………………………………………………………33
1.5
二抗孵育……………………………………………………………33
1.6
显色…………………………………………………………………34
第2 部分 分子生物学实验
实验7 大肠杆菌基因组DNA 的提取与定量…………………………37
实验8 大肠杆菌生物素连接酶基因的RCR 扩增及扩增产物的鉴定……43
实验9 小鼠肝组织中总RNA 的提取…………………………………45
实验10 逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR） …………………………47
附录材料………………………………………………………………………50
·VI·
